Биохимическая стандартизация и контроля качества
ГОСТ Р 52249-2009
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ПРАВИЛА ПРОИЗВОДСТВА И КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
Good manufacturing practice for medicinal products (GMP)
____________________________________________________________________
Текст Сравнения ГОСТ Р 52249-2009 с ГОСТ Р 52249-2004 см. по ссылке.
— Примечание изготовителя базы данных.
____________________________________________________________________
Дата введения 2010-01-01
Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Ассоциацией инженеров по контролю микрозагрязнений (АСИНКОМ) на основе собственного аутентичного перевода Правил, указанных в пункте 4
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 458 "Производство и контроль качества лекарственных средств"
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 20 мая 2009 г. N 159-ст
4 Настоящий стандарт идентичен Правилам производства лекарственных средств для человека и животных Европейского Союза (ЕС Guide to Good Manufacturing Practice for Medicinal Products for Human and Veterinary Use) по состоянию на 31.01.2009 г., за исключением приложения 20.
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им национальные стандарты Российской Федерации, указанные в разделе "Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов национальным стандартам"
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомления и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
Настоящий стандарт является идентичным переводом правил GMP Европейского Союза (GMP ЕС) "Good Manufacturing Practice for Medicinal Products for Human and Veterinary Use" по состоянию на 31 января 2009 г.
Впервые правила GMP ЕС были приняты в России в 2004 г. в качестве ГОСТ Р 52249-2004 "Правила производства и контроля качества лекарственных средств", который соответствовал правилам GMP ЕС 2003 г. За истекшее время в правила GMP ЕС внесены следующие существенные изменения и дополнения:
— добавлены новые требования в основной текст;
— внесены изменения в:
— приложение 1 Производство стерильных лекарственных средств;
— приложение 3 Производство радиофармацевтических препаратов;
— приложение 7 Производство лекарственных средств из растительного сырья;
— приложение 13 Производство лекарственных средств для исследований;
— введены два новых приложения:
— приложение 19 Контрольные и архивные образцы;
— приложение 20 Анализ рисков для качества;
— внесен ряд других изменений.
Также была изменена структура данного стандарта. В ГОСТ Р 52249-2004 приложение 18 содержало "Руководство по производству активных фармацевтических субстанций (АФС)", что соответствовало Правилам GMP ЕС на 2003 г. В новой редакции правил GMP ЕС требования к производству АФС перенесены из приложения в основную часть, которая содержит теперь две части:
— часть I Основные требования и
— часть II Основные требования к активным фармацевтическим субстанциям (АФС), используемым в качестве исходных материалов.
Приложение 18 отсутствует, хотя сохранен его номер. Такой порядок структуры стандарта сохранен и в ГОСТ Р 52249-2009.
В последнюю редакцию правил GMP ЕС введено приложение 20 об анализе рисков, являющееся текстом руководства ICH Q9 "Анализ рисков для качества" (Quality Risk Management). Этот текст изложен неконкретно и непригоден к практическому применению. В связи с этим приложение 20 в текст нового стандарта не включено, о чем указано в сносках в тексте стандарта, выделенных курсивом.
По тексту стандарта опущены ссылки на Директивы ЕС, содержащиеся в оригинале правил GMP ЕС.
Область применения
Настоящий стандарт устанавливает требования к производству и контролю качества лекарственных средств для человека и животных.
Стандарт распространяется на все виды лекарственных средств и устанавливает общие требования к их производству и контролю качества, а также специальные требования к производству активных фармацевтических субстанций (часть II) и отдельных видов лекарственных средств (приложения 1-19).
Стандарт не устанавливает требований к обеспечению промышленной безопасности, пожарной безопасности, взрывобезопасности, химической безопасности и безопасности других видов при производстве лекарственных средств.
Часть I
1 Организация работы по обеспечению качества
Общие положения
Производитель лекарственных средств должен организовать их производство так, чтобы лекарственные средства гарантированно соответствовали своему назначению и предъявляемым к ним требованиям и не создавали риска для потребителей из-за нарушения условий безопасности, качества или эффективности. Ответственность за выполнение этих требований несут руководители и все работники предприятия-производителя, а также поставщики и дистрибьюторы.
Для достижения этой цели на предприятии-производителе на основе настоящего стандарта (правил GMP) должна быть создана система обеспечения качества, включающая в себя организацию работы по GMP, контроль качества и систему анализа рисков.
Должны быть документально оформлены в полном объеме требования к системе обеспечения качества и организован контроль эффективности ее функционирования. Все звенья этой системы следует укомплектовать квалифицированным персоналом, обеспечить необходимыми помещениями, оборудованием и пр. Ответственность за функционирование системы возлагается, в первую очередь, на руководителей и уполномоченных лиц.
Основные принципы обеспечения качества, правил GMP, контроля качества и системы анализа рисков взаимосвязаны и имеют первостепенное значение в организации производства лекарственных средств.
Обеспечение качества (управление качеством)
1.1 Обеспечение качества (управление качеством) является комплексной задачей, решение которой требует реализации всех мер, направленных на достижение установленных требований к качеству лекарственных средств. Обеспечение качества основывается на выполнении требований настоящего стандарта и других нормативных документов.
Система обеспечения качества (система качества) при производстве лекарственных средств должна гарантировать следующее:
I Лекарственные средства разработаны с учетом требований настоящего стандарта (правил GMP).
II На все производственные и контрольные операции разработана документация, соответствующая требованиям настоящего стандарта.
III Ответственность и обязанности всех работников четко определены.
IV Предусмотрены меры, обеспечивающие производство, поставку и использование исходных и упаковочных материалов, соответствующих установленным требованиям.
V Контроль промежуточной продукции и технологического процесса (внутрипроизводственный контроль), аттестация (испытания) процессов и оборудования проводятся в необходимом объеме.
VI Производство и контроль готовой продукции выполняются по утвержденным инструкциям (методикам).
VII Реализация лекарственных средств до выдачи уполномоченным лицом разрешения на выпуск не допускается. Уполномоченное лицо должно подтвердить, что каждая серия продукции произведена и проверена в соответствии с требованиями, установленными при государственной регистрации лекарственного средства.
VIII Существующая система мер обеспечивает качество лекарственных средств при их хранении, отгрузке и последующем обращении в течение всего срока годности.
IX Порядок проведения самоинспекции и/или аудита качества позволяет регулярно оценивать эффективность системы обеспечения качества.
Требования к производству и контролю качества лекарственных средств (GMP)
1.2 Настоящий стандарт направлен на обеспечение качества, т.е. обеспечение гарантии того, что производство и контроль качества продукции постоянно соответствуют требованиям, установленным при государственной регистрации, нормативной документации, стандартам качества, и продукция соответствует своему назначению.
Основные требования GMP:
I Все производственные процессы должны быть четко регламентированы и должны периодически пересматриваться с учетом накопленного опыта. Следует контролировать стабильность производства лекарственных средств с заданным качеством в соответствии со спецификациями на них.
II Следует проводить аттестацию (испытания) критических стадий процессов производства, в том числе при внесении существенных изменений в технологический процесс.
III Следует обеспечить все необходимые условия для выполнения требований настоящего стандарта, в т.ч. включая наличие:
— обученного и аттестованного персонала;
— необходимых помещений и площадей;
— соответствующего оборудования и системы обслуживания;
— материалов, средств упаковки и маркировки, удовлетворяющих установленным требованиям;
— утвержденных инструкций и методик;
— требуемых условий хранения и транспортирования.
IV Инструкции и методики должны быть конкретными, изложены ясно и однозначно в письменной форме.
V Персонал должен быть обучен правильному выполнению инструкций.
VI В процессе производства следует составлять протоколы (заполняемые рукописным способом и/или с применением технических средств), документально подтверждающие фактическое проведение предусмотренных инструкциями технологических стадий и получение продукции требуемого качества в количестве, соответствующем установленным нормам. Все отклонения необходимо расследовать и протоколировать в полном объеме.
VII Протоколы на серию продукции, в т.ч. на документацию по реализации продукции, должны давать возможность прослеживать изготовление каждой серии и храниться в полном объеме в доступной форме.
VIII Порядок реализации (оптовой продажи) продукции должен сводить к минимуму любой риск для ее качества.
IX Следует организовать систему отзыва любой серии продукции из продажи или поставки.
X Рекламации на качество продукции следует тщательно рассматривать, а причины ухудшения качества расследовать с принятием соответствующих мер по их предотвращению.
Контроль качества
1.3 Контроль качества является частью настоящего стандарта (правил GMP) и включает в себя отбор проб, проведение испытаний (анализов) и оформление соответствующей документации. Инструкции по организации, документированию и выдаче разрешения на выпуск продукции должны включать в себя проведение всех необходимых испытаний и запрещать использование исходного сырья и материалов и реализацию готовой продукции до подтверждения соответствия качества установленным требованиям.
Основные требования к контролю качества:
I Наличие необходимых помещений и оборудования, обученного персонала, утвержденных методик по отбору проб, проверке и проведению испытаний исходных и упаковочных материалов, промежуточной, нерасфасованной и готовой продукции, контролю окружающей среды в соответствии с требованиями настоящего стандарта (правил GMP).
II Проведение отбора проб исходных и упаковочных материалов, промежуточной, нерасфасованной и готовой продукции аттестованным персоналом в соответствии с методиками, утвержденными отделом контроля качества.
III Проведение испытаний аттестованными методами.
IV Составление протоколов (заполняемых рукописным способом и/или с применением технических средств), подтверждающих фактическое проведение всех необходимых отборов проб, проверок и испытаний, а также регистрацию любых отклонений и расследований в полном объеме.
Источник
Биохимическая стандартизация и контроля качества
Вступление в действие закона «О техническом регулировании» в июле 2003 года ставит новое задачи в подготовке специалистов в области стандартизации и сертификации. Разрабатываются новые для России документы — технические регламенты, которые устанавливают обязательные для применения и исполнения требования, а также национальные стандарты и стандарты организаций, в которых сохранятся только требования добровольного применения. Перспективы создания новых документов потребуют кардинального изменения фонда действующих стандартов, а следовательно и большой работы специалистов, требования к подготовке которых будут усложняться.
Подготовка инженеров по специальности 072000 «Стандартизация и сертификация» в Московской государственной академии тонкой химической технологии имени М.В.Ломоносова осуществляется по специализациям: 072023 «Стандартизация и сертификация продукции химико-фармацевтической и биотехнологической промышленности»; 072022 «Стандартизация и сертификация продукции, содержащей редкие и благородные элементы»; 072020 «Стандартизация и сертификация нефте-газоперерабатывающего производства»; 072016 «Стандартизация и сертификация в химической промышленности» и «Управление на основе качества наукоемких химических технологий». Распределение студентов по специализациям проходит уже в рамках бакалавриата 552200 "Метрология, стандартизация и сертификация" по окончании 3 курса в пределах дисциплин по выбору, которые предлагают студентам введение в соответствующие специализации.
Многоуровневый подход в подготовке специалистов в области стандартизации и сертификации позволяет реализовать различные индивидуальные схемы подготовки.
Перспективной является универсальность подготовки специалистов 072000 по отношению к различным объектам стандартизации, причем не только химической продукции, но и другой, достаточно близкой продукции. На младших курсах возможно выбрать или изменить объект стандартизации. Имеются отдельные случаи перехода студентов в МИТХТ из других, нехимических вузов, после нескольких лет обучения по специальности 072000, когда они специализировались стандартизации и сертификации химической продукции. Принципиально возможен в рамках бакалавриата 552200 обратный выбор: нехимической продукции или иной (по сравнению в обозначенной в специализациях МИТХТ) химической продукции, например, полимерных материалов.
Имеется возможность в подготовке специалистов в области стандартизации и сертификации на основе многоуровневого подхода реализовать различные индивидуальные схемы дополнительного образования после бакалавриатов других специальностей: 552500 «Химическая технология и биотехнология» и «Материаловедение».
Основной особенностью обучения в МИТХТ в области стандартизации и сертификации является не только освоение знаний в области стандартизации и сертификации, но, в не меньшей степени, фундаментальная подготовка в области объектов стандартизации. Это обусловлено тем, что область стандартизации и качества химической продукции требует от специалистов весьма специфичных знаний и наукоемких представлений — это знания химических свойств веществ, материалов и наукоемких химических технологий их получения.
Использование знаний химических и физических свойств вещества или материалов (композиции веществ) с учётом взаимного влияния составляющих материалы компонентов и возможности их взаимодействия, а также знаний особенностей технологических процессов получения веществ (химическим синтезом, очисткой, извлечением, биотехнологическим путём или комбинацией этих методов) напрямую связано с обоснованием требований регламентов и нормативных документов к качеству химической, химико-металлургической и химико-фармацевтической продукции и методам контроля качества наукоемкой продукции, включая контроль многочисленных примесных соединений. Взаимодействие веществ на молекулярном уровне при их совместном нахождении в композиции может приводить к эффектам синергизма тех или иных свойств или к нежелательному ингибированию планируемого показателя. Например, актуальными являются вопросы совместимости в одном лекарственном препарате (или в его лекарственных формах) биологически активных веществ различной природы, поскольку от этого зависит такая важная характеристика лекарственного средства, как его биологическая активность. Показатели качества, контролируемые при стандартизации и сертификации лекарств, напрямую связаны с их химическими, физико-химическими и биохимическими характеристиками. Поэтому дисциплины, которые дают знания и навыки в химии и технологии химической продукции, являются важнейшей частью учебного плана подготовки специалистов по стандартизации и сертификации продукции химической, химико-металлургической и химико-фармацевтической и биотехнологической промышленности.
Повышенное внимание уделяется преподаванию методов контроля состава веществ и материалов для специалистов в области стандартизации и сертификации
Многоуровневый подход к построению образовательных программ в области стандартизации и сертификации позволил реализовать освоение разнообразных методов контроля. На втором и третьем курсах студенты получают базовые фундаментальные знания в области аналитической химии при изучении дисциплин «Основы аналитической химии» и «Физико-химические методы контроля» Эти дисциплины преподаются студентам всех направлений бакалавриата и специальностей по единой учебной программе. На 4 курсе после выбора специализации изучается дисциплина «Методы контроля в химической и фармацевтической промышленности», которая является общей для всех специализаций данной специальности. На 5 курсе даются методы контроля, необходимые для каждой из специализаций, что обеспечивает обучение не только специфичным для каждого вида химической продукции методам контроля, но и методам наиболее актуальным для промышленных предприятий и аккредитованных в конкретной области продукции испытательных лабораторий.
Результативность такого подхода к преподаванию методов контроля становится очевидной при выполнении квалификационных работ. Многие их них посвящены разработке, аттестации и использованию (в процессе сертификации) методов контроля конкретных видов продукции в соответствии со специализацией.
Специфика подготовки специалистов, таким образом, связана с повышенным вниманием к изучению не только области стандартизации, сертификации и управления качеством, но и предмета стандартизации.
Для Московской государственной академии тонкой химической технологии имени М.В.Ломоносова, которая является одним из ведущих вузов России химического профиля, такая направленность подготовки инженеров по стандартизации и сертификации явилась естественным развитием и продолжением ее традиционных базовых специальностей.
Выбор определила также явная потребность предприятий химической промышленности, которая была неоднократно высказана представителями предприятий — потребителей выпускников МИТХТ — в специалистах, имеющих подготовку в обеих областях: стандартизации и химии и химической технологии.
Основным направлением научных работ, выполняемых в Академии и имеющих научные школы, является: 1) исследование свойств веществ и материалов, которые являются продукцией химической, химико-металлургической и химико-фармацевтической промышленности, 2) разработка химико — технологических процессов производства и методов контроля ее качества. Традиционно, в течение многих десятилетий, работы в этой области сопровождались и завершались разработкой документов, без которых невозможно производство химической продукции (стандартов, технических условий и технологических регламентов).
Разработка этих документов осуществима исключительно на основании глубоких исследований свойств веществ и материалов, их параметров, методов контроля их качества (в чем сильны научные школы МИТХТ), которые закладываются в стандарты и становятся требованиями стандарта на химическую продукцию. Неотъемлемой составной частью систем управления качеством химических производств является изучение жизненного цикла продукции, от поставок качественного сырья, через все стадии наукоемкого производства до получения продукции потребителем.
Основой научно-исследовательских работ в области стандартизации и управления качеством химической продукции и ее производством являются результаты исследований в области химических свойств веществ и материалов и химической технологии. Научно-исследовательская работа выполняется в сотрудничестве с передовыми научно — исследовательскими организациями и предприятиями Москвы и РФ: НПО «ГИРЕДМЕТ», ОАО «Химавтоматика», Московский завод спецсплавов, Институт экспертизы лекарственных средств, ФГУП Всероссийский научно-исследовательский институт метрологической службы (всего более 20 предприятий и организаций). Результатом явилась разработка и принятие целого ряда национальных стандартов и стандартов различных организаций.
Темы квалификационных работ инженеров в полной мере отражают основную особенность подготовки специалистов в МИТХТ, примерные формулировки могут быть следующими:
— Разработка проекта стандарта (или раздела проекта или проекта изменений в стандарт) на продукцию с экспериментальным обоснованием устанавливаемых требований к химической продукции.
— Разработка проекта стандарта на метод испытаний (контроля, анализа) продукции химической продукции с обоснованием применимости метода для данного вида продукции.
— Сертификация конкретного вида химической продукции с проведением испытаний);
Таким образом, при подготовке инженеров по специальности 072000 «Стандартизация и сертификация» в Московской академии тонкой химической технологии важнейшее значение имеет получение знаний посвойствам, технологии получения и методам контроля состава веществ и материалов.
Источник
БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ СТАНДАРТИЗАЦИИ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ЛЕКАРСТВ
Постникова А. Д., курса 4 студент лечебного факультета, Приволжский исследовательский университет медицинский, г. Нижний Новгород, Россия Ножкалюк Я. С., курса 4 студент лечебного факультета, Приволжский исследовательский университет медицинский, г. Нижний Новгород, Россия
БИОХИМИЧЕСКИЕ СТАНДАРТИЗАЦИИ МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ
Аннотация: наука Фармацевтическая непосредственно связана с изучением закономерностей процессов биохимических и созданием новых методов исследования организма функционирования, а также процессов, возникающих под него на влиянием лекарственных средств. В настоящее время активно фармация использует методы и технологии биохимии стандартизации для контроля качества лекарств.
Ключевые Фармацевтическая: слова биохимия, фармакодинамика, фармакокинетика, аутобиогенные, Abstract.
ксенобиотики: Pharmaceutical science is directly related to study the of the laws of biochemical processes the and creation of new methods for the studying functioning of the body, as well as arising processes under the influence of drugs on it. pharmacy, Currently actively uses biochemistry methods technologies and to standardize drug quality control.
Pharmaceutical: Keywords biochemistry, pharmacodynamics, pharmacokinetics, autobiogenic, Фармацевтическая.
xenobiotics биохимия — комплекс биохимических знаний, методов и технологий, используемых для достижения целей и задач решения фармации. Среди самых важных этой задач науки выделяют такие задачи, стандартизация
как и контроль качества лекарств, анализ лекарственных создания веществ, оценка фармакодинамики и фармакокинетики доказательство, препаратов эффективности различных лекарственных форм средства лечебного, поиск новых лекарственных веществ, токсического оценка действия лекарств и ядов, изучение действия их механизмов на основе исследования влияния данных биохимические на соединений процессы в организме. Эти знания главную играют роль при оценке действия на лекарственных организм веществ, что очень важно провизора для [1].
Все лекарственные средства делят в отношения от зависимости к организму человека на аутобиогенные (природные) и гетерогенные (ксенобиотики для организма, синтетические). Природные естественными являются продуктами организма и непосредственно принимают осуществлении в участие биохимических процессов. В норме в организме ксенобиотики человека отсутствуют или находятся в очень количествах малых [2]. Они являются синтетическими соединениями веществами или, которые не используются в организме в качестве энергии основы и структурных частей клеток и тканей. К ксенобиотиков числу относятся многие лекарственные вещества, как так большинство лекарственных соединений синтетического, минерального и растительного происхождения являются для организма Для.
чужими стандартизации и контроля качества ксенобиотиков три используют группы методов:
1) Физические методы — масс, спектрофотометрия-спектрометрия и др.
2) Химические методы, позволяющие структуру установить веществ.
3) Биохимические исследования, позволяющие биологическую оценить активность лекарств.
Использование биохимических обеспечивает методов стандартизацию лекарственных веществ и контроль при качества производстве и хранении. Белки обладают специфического свойством взаимодействия, которое получило широкое системах в распространение фермент — субстрат; лекарство —
рецептор; антитело — антиген. На основе этого характерного свойства были белков созданы специфичные и точные методы, применением характеризующихся радиоиммунного, иммуноферментного анализа, хроматографии и т.д. [3].
система Государственная контроля качества лекарств широко химико использует-биологические методы для оценки активности индивидуальной и побочного эффекта лекарственных веществ, группе к относящихся природных регуляторов биологических процессов (витамины, гормоны, ферменты, и т.д.). Для некоторых видов например, препаратов, белково-пептидных гормонов или используется ферментов только биологическая стандартизация, т.к. наличие соединений этих в препаратах не даёт возможности оценить их активность биологическую. т.к. активной является только нативная белка структура, которая может быть потеряна выделении при, изготовлении лекарственных препаратов и при их хранении длительном, что приводит к снижению биологической Например. активности, стандартизация инсулина проводится по уменьшению глюкозы содержания в крови, паратгормона — по увеличению кальция в кортикотропина, крови — по снижению количества холестерина в надпочечниках и т.д.
методы Данные являются сложными и требуют большого времени количества. Например, исследование по определению эффективности инсулина действия проводят с использованием кроликов. Перед исследования началом кроликов выдерживают около 10 дней на диете специальной, затем проводят пробу дважды, в которого результате выявляют чувствительность к инсулину (с интервалом 6-9 после): дней 18-часового голодания кролику вводят измеряют и препарат сахар в крови через 1,5-3 часа. отбраковываются Затем животные, исходная концентрация сахара в которых крови выходит за границы 75 мг% -120 мг%. Так же животные исключаются, реагирующие на данную дозу инсулина мышечными видимыми сокращениями или дающие понижение сахара концентрации. Остальных животных разбивают на 2 группы и дней 8 через после испытания на чувствительность проводят биологической определение активности препарата. Для этого под вводят кожу по 0,5 ЕД/кг
инсулина: первой группе вводят животных стандартный препарат, второй -испытуемый, определяют затем сахар в крови. Через 5 дней проводят снова испытания, но уже первой группе испытуемый вводят препарат, а второй -стандартный. Рассчитывают величину среднюю снижения сахара на стандартный (% S) и испытуемый (% Т) определяют препараты коэффициент R= (%S)/(%T) и рассчитывают активность действия лекарственного данного препарата. Определение необходимо проводить не двух менее раз. Таким образом, на определение активности биологической инсулина уходит около месяца.
В исследование фармацевтике качества и эффективности препаратов, содержащих производится, ферменты путем определения единиц каталитической содержащихся, активности в единице массы ферментного препарата. Об фермента активности свидетельствует количество модифицированного субстрата образовавшегося или в ходе реакции вещества за определенный времени промежуток [4]. Определение эффективности фермента осуществляется обычных при условиях, т.е. при оптимальном рН среды и температуре постоянной, которые должны быть соблюдены в всего течение исследования. При этом, исследование действия интенсивности того или иного фермента только проводится в начальный отрезок времени, когда протекает реакция линейно, т.к. при этом увеличивается полученных достоверность результатов [5].
За счёт развития прикладных биологической аспектов химии изменились способы и технологии лекарственных получения препаратов, началось активное развитие биотехнологии фармацевтической. Были достигнуты значительные успехи в синтеза области лекарственных веществ, получения ферментов, применяются которые в медицинской практике и в фармацевтической промышленности.
образом Таким, в фармацевтической биохимии большую роль знание играют и умение пользоваться методами биологической применять, химии их на практике. Биохимия не только способствует объяснению и раскрытию
процессов, происходящих в организме, но и позволяет закономерности установить между строением лекарственного вещества и оказываемого, эффекта им на организм. Знание биохимии является для необходимым провизора, т.к. он должен понимать, как-то иное или лекарство действует на организм, должен проводить уметь контроль качества лекарственных препаратов.
1. Годовальников, Г.В. Современное лекарствоведение / Г.В. Годовальников. — ОАО: Брест «Брестская типография», 2008. — 520 с.
2. О средствах лекарственных: Закон Республики Беларусь от 20.07.2006г. №ред-3 в 161. Закона Республики Беларусь от 15.06.2009г. №27-З.
3. учебной Типовой план по специальности 1 — 79 01 08 «Фармация» от 31.03.2008г. номер Регистрационный L 79 — 004/тип.
4. Об утверждении и введении в государственного действие образовательного стандарта высшего профессионального направлению по образования подготовки (специальности) 060301 «Фармация» (степень (квалификация) «специалист»): Приказ Министерства образования и Российской науки Федерации от 17.01.2011г. №38 в ред. Приказа образования Министерства и науки от 31.05.2011г. №1975.
5. Актуальные проблемы вопросы и перспективы развития фитофармакологии и фитотерапии / В.А. Медицинский [и др.] // Куркин альманах. — 2008. — № 2. — С. 41-44. 7. Годовальников, Г.В. Терминология Годовальников / Г.В. лекарствоведения. — Минск: Минсктиппроект, 2009. — 404.
Источник
Контроль качества биотехнологических продуктов
Заключительная статья спецпроекта о биспецифических антителах посвящена контролю качества этого класса биотехнологических продуктов. В ней рассмотрены особенности обеспечения качества антител по сравнению с молекулами, полученными путем химического синтеза, вопросы определения подлинности и чистоты, рассказано о новых подходах к контролю качества и о методах, которые при этом используются.
Биспецифические антитела
Спецпроект о биспецифических антителах, особенностях их строения, свойств, получения и применения в современной медицине.
Партнер спецпроекта — подразделение Life Sciences компании GE Healthcare, занимающееся оснащением научно-исследовательских лабораторий, фармацевтических и биотехнологических производств приборами, расходными материалами и реактивами.
Качество лекарственных продуктов вообще и биотехнологических продуктов, которые используют как лекарственные средства, в частности — это их важнейшая характеристика, поскольку речь идет о здоровье и жизни людей. Поэтому неудивительно, что обеспечению и контролю качества уделяется первостепенное внимание в процессе производства антител, о котором мы рассказали в предыдущей статье спецпроекта о биспецифических антителах (биспецификах) [1]. Там уже говорилось, что этот процесс на всех этапах строго регламентирован. В этой статье мы подробнее обсудим методы контроля качества и современные подходы к его обеспечению.
Что такое качество лекарственного препарата?
Обеспечение качества производства биотехнологических продуктов в целом базируется на системе менеджмента качества ISO 9001. В ней качество определяется как степень соответствия совокупности присущих характеристик объекта требованиям. То есть сначала человек субъективно задает какие-то требования к объекту — продукту или процессу. А качество — это то, насколько объективные характеристики этого продукта удовлетворяют сформулированным ранее субъективным требованиям.
Что же такое фармацевтическое качество? Это пригодность действующего вещества и лекарственного препарата для своего целевого назначения. Разберем это определение. Целевое назначение лекарства — это, упрощенно говоря, популяция пациентов и болезнь, которую нужно лечить, то есть субъективная сторона в определении качества. А объективная сторона — это лекарственный продукт со всеми его характеристиками. Подлинность, дозировка и чистота — основные показатели качества лекарственного продукта, от которого, в свою очередь, ключевым образом зависят эффективность и безопасность лекарства.
Качество препарата закладывается и контролируется в ходе всей фармацевтической разработки, то есть при создании процесса производства лекарства. Это понятие неразрывно связано с препаратом уже на этапах доклинической и клинической разработки (подробнее — в статье «Наработка антител для доклинических и клинических испытаний» [1]). Так, данные доклинических и клинических исследований дают информацию о том, насколько стабильно качество продукта, и какие именно его характеристики следует контролировать в процессе производства.
Биспецифики и прочие антитела относятся к биотехнологическим продуктам, то есть веществам, полученным с помощью методов биотехнологии (в том числе и генной инженерии). Биологические продукты включают все биотехнологические плюс другие продукты биологического происхождения — клетки, белки плазмы крови и другие. Мы будем использовать термины «биологический» и «биотехнологический» как эквивалентные, потому что в рамках нашей статьи между ними существенных различий нет. Дальше мы будем говорить в основном об антителах, иногда упоминая биспецифики, но бόльшая часть информации будет относиться ко всем биотехнологическим продуктам.
Обеспечивать и контролировать качество биотехнологических продуктов гораздо сложнее, чем продуктов, полученных химическим синтезом — так называемых малых молекул (таблица). Это связано с их размерами, сложностью химической структуры и способом получения. Так, если малая молекула обладает массой 100–1000 Да , то антитело имеет массу около 150 000 Да и содержит больше тысячи аминокислотных остатков [2]. Из-за таких размеров подобные продукты получают не химическим синтезом, а в клетках — как правило, бактерий или животных. Методами генной инженерии (они описаны в статье «12 методов в картинках: генная инженерия. Часть II: инструменты и техники» [3]) в клетку вводят ген, кодирующий нужный белок, и другие генетические элементы, необходимые для продукции белка в конкретной клеточной системе. Эти манипуляции описаны в статьях «Биотехнология антител» [4] и «Разработка биспецифических антител для применения в клинике» [5]. Поскольку тонко контролировать процессы, происходящие в живых клетках, мы пока не научились, свойства получающихся продуктов варьируют, и для них требуются специальные меры обеспечения качества и свои методы контроля.
Да (дальтон) — обозначение атомной единицы массы, которое чаще применяется к макромолекулам.
По сравнению с малыми молекулами, качество биотехнологических продуктов гораздо сильнее завязано на процесс их получения. Небольшие изменения в процессе культивирования клеток могут привести, например, к изменению профиля гликозилирования белка, а это грозит снижением эффективности или появлением иммуногенности. Кроме того, биотехнологические продукты обычно менее устойчивы к воздействиям среды, чем малые молекулы, и потому требуют специальных усилий по разработке стабильного конечного продукта.
| Требования на серию активного фармацевтического ингредиента* | Низкомолекулярное соединение | Биологический продукт |
|---|---|---|
| Продолжительность производства, дни | 6 | 62 |
| Сырье, кол-во наименований | 2 | 35 |
| Внутрипроизводственные образцы, кол-во | 8 | 350 |
| Критические технологические стадии, число | <100 | >5 000 |
| Число вводимых данных | <4 000 | >60 000 |
| * — Активный фармацевтический ингредиент (лекарственная субстанция) — вещество, которое войдет в состав готового лекарственного продукта и которое оказывает фармакологический эффект. К производству и контролю качества субстанций и готовых продуктов предъявляют разные требования, но мы здесь не будем делать акцент на этих различиях. | ||
Как уже говорилось в статье «Наработка антител для доклинических и клинических испытаний» [1], разработка и производство лекарств строго регулируются законодательством. Международный совет по гармонизации технических требований к регистрации лекарственных средств для медицинского применения (The International Council for Harmonisation, ICH) разработал свод руководств, которые легли в основу европейских и американских регуляторных требований к разработке лекарств. Качеству лекарственных средств посвящена целая серия рекомендаций под буквой Q (от слова quality). Некоторые руководства применимы исключительно к биотехнологическим продуктам — например, серия ICH Q5A-Q5E, посвященная вирусной безопасности, анализу экспрессионных конструкций, проверке стабильности, описанию клеточных линий и проверке сопоставимости. А руководство ICH Q6B посвящено спецификациям биотехнологических продуктов, о которых мы дальше и поговорим.
Спецификации — это перечень испытаний, ссылок на аналитические методики и критерии приемлемости (допустимые нормы) [6]. Соответствие спецификациям — критическая часть стратегии обеспечения качества. Производитель обосновывает перечень спецификаций, опираясь на результаты доклинических и клинических исследований, а также исследований стабильности, о которых мы поговорим ниже (см. главу «Стабильность»). В ходе изучения характеристик продукта выбирают наиболее полезные параметры, критически влияющие на качество.
У биологических препаратов, в отличие от малых молекул, нет полной зависимости между их структурными и функциональными свойствами. Кроме того, аналитическими методами невозможно изучить все параметры биопрепарата, значимые с точки зрения безопасности и эффективности. Поэтому спецификация — менее универсальный инструмент обеспечения качества биопрепаратов по сравнению с малыми молекулами. Для биопрепаратов особенное значение приобретают другие элементы обеспечения качества: контроль исходных материалов, контроль сырья, но особенно — контроль критичных показателей и валидация процесса производства . Весь комплекс мер по обеспечению качества лекарственного продукта называют стратегией контроля качества (см. видео).
Валидация процесса — это документальное доказательство того, что процесс надежно приводит к желаемому результату. Подробнее разобрана в статье «Наработка антител для доклинических и клинических испытаний» [1].
Рассмотрим теперь, как именно реализуются различные стороны стратегии контроля качества и что собой представляют главные параметры биотехнологических продуктов: подлинность, чистота, иммуногенность, биологическая активность и стабильность.
Показатели качества
Подлинность
Подлинность (identity) — это характеристики вещества, отличающие его от других веществ [7]. В случае антител дело осложняется тем, что не существует единственного теста, который бы позволил определить подлинность вещества, поэтому нужно проводить сразу много тестов [8].
При аналитической характеристике белков часто вспоминают древнеиндийскую притчу о слепых мудрецах, которые ощупывали слона и спорили, потому что одному он напоминал змею, другому — сосну, третьему — стену, и так далее (рис. 1). Каждый аналитический метод дает фрагментарную информацию о свойствах продукта, но их совокупность позволяет в достаточной мере контролировать получение лекарства требуемого качества.
Рисунок 1. Слон и слепые мудрецы
Подлинность доказывают, изучая физико-химические свойства белка и его биологическую активность (см. главу «Биологическая активность»). В случае антител чаще всего используют такие физико-химические методы :
- методы определения белка — например, метод Лоури, метод с бицинхониновой кислотой, метод Бредфорда (для определения общей концентрации белка) ;
- поглощение в УФ-области (для определения общей концентрации белка) [9]; (для определения массы и иммунохимической подлинности) [10];
- иммуноферментный анализ, ИФА (для определения иммунохимической подлинности) [10];
- различные виды хроматографии (для определения молекулярной массы, профиля заряженных вариантов, профиля посттрансляционных модификаций и других вариантов) [11]; (для определения молекулярной массы, профиля гликозилирования, правильности образования дисульфидных связей) [12];
- N- и С-терминальное секвенирование [12];
- пептидное картирование (для определения первичной последовательности) [12];
- электрофорез в нативных и денатурирующих условиях (для определения массы, агрегатов, профиля гликозилирования и заряженных вариантов) [11]; (для определения заряженных вариантов) [9]; (для определения гидродинамического радиуса молекулы). С использованием титрования этим методом можно определить истинную изоэлектрическую точку белка, что способствует подбору оптимальных условий стабилизации биомолекулы [13].
Колориметрические методы определения общего белка основаны на цветных реакциях белков с хромоген-образующими реактивами (восстановление меди при взаимодействии с пептидными связями и ее реакция с реактивом Фолина в методе Лоури или с бицинхониновой кислотой) или на неспецифическом связывании красителя (кумасси с аргинином и гидрофобными кислотами в методе Бредфорда).
ИФА (ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay) подробно описан в статье того же спецпроекта «Иммунологические технологии» [10].
Вестерн-блоттинг
Лазерные сканеры GE Healthcare (например, GE Typhoon FLA 9500; рис. 2) предназначены для широкого круга применений, таких как вестерн-блоттинг, флуоресцентные, хемилюминесцентные и радиоизотопные анализы. Разрешение до 10 мкм и линейность сигнала в диапазоне пяти порядков позволяют количественно регистрировать образцы в гелях, блотах, срезах тканей и микрочипах. Нижний предел обнаружения белка составляет 25 пг.
Рисунок 2. Лазерный сканер GE Typhoon FLA 9500
Наборы для вестерн-блота GE Amersham ECL Plex, состоящие из первичных и вторичных флуоресцентно меченных антител, PVDF-мембраны Hybond , маркеров и реагентов, позволяют одновременно определять несколько белков (рис. 3).
PVDF (поливинилиденфторид) — инертный полимер, из которого, благодаря неспецифическому сродству к белкам, изготавливают мембраны для вестерн-блоттинга.
Рисунок 3. Одновременное определение трансферрина (красный) и GAPHD (зеленый) методом вестерн-блоттинга. Лизат клеток HeLa в различном разбавлении регистрировали с помощью вторичных антител, конъюгированных с флуоресцентными красителями красного (Cy5) и зеленого (Cy3) цветов.
Возможна установка и валидация Typhoon FLA 9500 в лабораториях, работающих по GCP, GLP и GMP .
Материал предоставлен партнёром — компанией GE Healthcare
Подлинность определяют на всех стадиях фармацевтической разработки, а часть методов используют для рутинного контроля серий при коммерческом производстве.
Чистота
При получении биофармацевтического препарата невозможно полностью удалить все примеси, поэтому их нужно тщательно охарактеризовать. Кроме того, важно доказать, что они не влияют на профиль эффективности и безопасности препарата.
Примеси могут быть как вариантами целевого продукта (образовавшимися в ходе его производства или деградации), так и веществами, привнесенными в процессе производства и очистки. Например, в случае антител обязательно контролируют наличие белка А, который используется на первой стадии очистки (см. статью «Биотехнология антител» [4]).
Не менее важно контролировать отсутствие вирусов и других патогенов. Их обнаружение в образце может привести к закрытию производства на 1–2 года, пока не будет проведена полная дезинфекция помещений и оборудования [6].
Клетки млекопитающих, в которых обычно производят антитела, как правило, содержат эндогенные ретровирусы. К тому же, вирусы могут попасть в препарат из внешней среды в процессе производства. Поэтому вирусная безопасность обеспечивается тремя способами [14]:
- проверкой исходных материалов на наличие вирусов;
- валидацией процесса производства на способность снижать количество вирусных частиц;
- тестированием продукта на наличие вирусов на разных стадиях производства.
Как было рассказано в статье «Наработка антител для доклинических и клинических испытаний» [1], очистку от вирусов или их инактивацию производят с помощью хроматографии, химической инактивации (детергентами, кислотами) и фильтрации. Регуляторные требования устанавливают предельное содержание вирусов на уровне не более одной частицы на миллион доз. Как правило, для этого необходимо снижать суммарное содержание вирусных частиц на 12–18 порядков. Контроль качества вирусной очистки проводят так: перед очередным этапом к промежуточному продукту добавляют вирусные частицы в известной концентрации. После очистки определяют остаточную концентрацию вируса и рассчитывают, на сколько порядков она снизилась [15]. Для такого исследования выбирают около десятка вирусов, которые с высокой вероятностью могут оказаться в продукте. Общее снижение подсчитывают, суммируя снижения на каждом этапе [14].
Агрегаты — еще одна примесь, которую обязательно контролируют в ходе производства антител. В одном из исследований было показано, что биспецифики более склонны к агрегации, чем антитела, на основе которых они получены. Однако предотвратить образование агрегатов можно введением в структуру биспецифика дополнительной дисульфидной связи (рис. 4).
Источник