Определение бактериальной обсемененности молока ГОСТ 9225 84

Определение бактериальной обсемененности молока (ГОСТ 9225 – 84)

Редуктазная проба.Экспериментально установлена зависимость между продолжительностью обесцвечивания метиленовой сини (или резазурина) и приблизительным содержанием микроорганизмов в молоке, поэтому редуктазная проба — косвенный показатель бактериальной обсемененности молока. Микроорганизмы (в т.ч. молочнокислые бактерии), развиваясь в молоке, вырабатывают фермент редуктазу, которая восстанавливает (обесцвечивает) метиленовую синь или резазурин. Чем больше в молоке микроорганизмов, способных выделять редуктазу, тем быстрее произойдет обесцвечивание и проба приобретет белый цвет.

1) с метиленовой синью.

Техника определения. В стерильную пробирку наливают 1 мл рабочего раствора метиленовой сини и 20 мл молока. Закрыв про-J бирку стерильной пробкой, молоко смешивают с раствором метиленовой сини путем медленного трехкратного переворачивания пробирки. Пробирки ставят в редуктазник или водяную баню при температуре 37±1°С, которая остается постоянной на время проведения анализа. Вместо водяной бани пробирки можно поставить в термостат, предварительно нагретый до 37°С.

Момент смешивания молока с метиленовой синью фиксируют как начало анализа. За окраской молока наблюдают через 40 мин, 2,5 ч и 3,5 ч. Окончанием анализа считают момент обесцвечивания метиленовой сини, при этом не учитывают остающийся вверху небольшой (до 1 см) кольцеобразный окрашенный слой или небольшую окрашенную часть внизу пробирки. В зависимости от продолжительности обесцвечивания метиленовой сини молоко относят к одному из четырех классов

Время обесцвечивания	Количество бактерий в 1 мл	Класс молока
стандартный метод	ускоренный метод
свыше 3,5 ч	более 3 ч	до 300 тыс.	высший
от 2,5 до 3,5 ч	от 1 до 3 ч	от 300 тыс. до 500 тыс.	I
от 40 мин до 2,5 ч	от 8 мин до 1 ч	от 500 тыс. до 4 млн.	II
40 мин и менее	менее 8 мин	от 4 млн. до 20 млн.	III

2) с резазурином. Исследование следует проводить не ранее чем через 2 часа после доения. Определение бактериальной обсемененности молока с метиленовой синью требует сравнительно много времени. Одним из методов ускорения анализа является замена метиленовой сини резазурином. В свежем молоке резазурин дает сине-стальное окрашивание. При восстановлении краски ферментом редуктазой цвет меняется от фиолетового до розового, а в дальнейшем окрашивание исчезает:

резазурин резаруфин дегидрорезаруфин

(сине-стальной) (розовый) (белый)

По сравнению с метиленовой синью (в зависимости от количества микрофлоры) на определение бактериальной обсемененности с резазурином требуется времени до 1 ч, а плохое и очень плохое молоко можно определить по изменению цвета уже через 10 минут.

Техника определения. В стерильные пробирки наливают 10 мл молока и 1 мл рабочего раствора резазурина, закрывают стерильными пробками и медленно перевертывают 3 раза, не допуская встряхивания. Пробирки помещают в редуктазник (водяную баню, термостат) при температуре 37-38 о С и отмечают время начала анализа. Изменение окраски отмечают через 1 ч., пробирки, имеющие серо-сиреневую окраску до сиреневой со слабым серым оттенком, оставляют в редуктазнике еще на 30 мин. класс молока определяют, пользуясь таблицей.

Время обесцвечивания, ч	Окраска молока	Количество бактерий в 1 мл молока	Класс молока
1,5	серо-сиреневая до сиреневой со слабым серым оттенком	до 300 тыс.	высший
1,0	серо-сиреневая до сиреневой со слабым серым оттенком	от 300 тыс. до 500 тыс.	I
1,0	сиреневая с розовым оттенком или ярко-розовая	от 500 тыс. до 4 млн.	II
1,0	бледно-розовая или белая	от 4 млн. до 20 млн.	III

Бродильная проба.Метод основан на способности некоторых микроорганизмов, присутствующих в молоке, свертывать его. В зависимости от времени свертывания и характера образовавшегося сгустка оценивают состав микрофлоры молока и пригодности его для производства сыра. Проба применяется при определении пригодности молока для производства сыра.

Техника определения. В чисто вымытые широкие пробирки, хорошо просушенные и ополоснутые два-три раза тем же молоком, из которого отбирают пробу, наливают около 20 см 3 молока. Пробирки закрывают ватными пробками и ставят в термостат при температуре 38±1 О С на 24 ч.

Через 12 ч после помещения пробирок в термостат или водяную баню производят первичный осмотр проб. Если молоко не свернулось или лишь начинает свертываться, оно считается хорошим. Если свернулось и сгусток вспученный — плохое. Вторично пробы просматривают спустя еще 12 ч и на основании этого просмотра относят молоко к одному из четырех классов.

Класс	Оценка качества молока	Характеристика сгустка
I	Хорошее	Начало свертывания без выделения сыворотки и пузырьков газа; незначительные полоски на сгустке
II	Удовлетворительное	Сгусток с полосками и пустотами, заполненными сывороткой; сгусток стягивается со слабым выделением сыворотки, структура сгустка мелкозернистая
III	Плохое	Сгусток с обильным выделением зеленоватой или беловатой сыворотки; сгусток крупнозернистый; наблюдают пузырьки газа в сгустке или сливочном слое
IV	Очень плохое	Сгусток разорван и пронизан пузырьками газа; вспучен, как губка

Сычужно бродильная проба. Метод основан на способности некоторых микроорганизмов и сычужного фермента свертывать молоко. По характеру образовавшегося сгустка оценивают качество молока на его пригодность для производства сыра. Для постановки сычужно-бродильной пробы используют сычужный порошок из сычугов телят и ягнят-молочников, соответствующий по показателям качества следующим данным:

Техника определения. В чисто вымытые широкие пробирки, хорошо просушенные и ополоснутые два-три раза тем молоком, из которого отбирают пробу, наливают около 30 см 3 молока, затем вносят в каждую пробирку по 1см 3 раствора сычужного фермента, хорошо перемешивают и ставят на 12 ч в водяную баню или термостат при температуре 38±1 О С. По истечении 12 ч пробы осматривают и относят молоко к одному из трех классов.

Источник

Определение бактериальной обсемененности молока гост

Турбидофлуориметрический экспресс-метод определения бактериальной обсемененности

Milk. Turbidofluorimetric rapid method for estimating total bacterial load

Дата введения 2020-01-01

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом маслоделия и сыроделия — филиалом Федерального государственного бюджетного научного учреждения "Федеральный научный центр пищевых систем им.В.М. Горбатова" РАН (ВНИИМС — филиал ФГБНУ "ФНЦ пищевых систем им.В.М.Горбатова" РАН)

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 28 сентября 2018 г. N 112-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Госстандарт Республики Беларусь

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 10 октября 2018 г. N 745-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34472-2018 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2020 г.

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на приборный турбидофлуориметрический экспресс-метод определения бактериальной обсемененности сырого молока по интенсивности флуоресценции веществ, образующихся из флуорогенного субстрата, в процессе жизнедеятельности микроорганизмов.

Диапазон измерения бактериальной обсемененности сырого молока — от 2·10 до 5·10 КОЕ/см.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте применены нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.0.004-2015 Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 26809.1-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты

ГОСТ 27752-88 Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 32901-2014 Молоко и молочная продукция. Методы микробиологического анализа

ГОСТ ИСО 5725-6-2002** Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

** В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины в соответствии с [1], а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 бактериальная обсемененность: Количество аэробных, факультативно-анаэробных и анаэробных микроорганизмов, способных проявлять свою жизнедеятельность в сыром молоке при температуре 30°С.

Примечание — Количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) — это количество микроорганизмов, вырастающих и образующих видимые колонии на твердом питательном агаре при температуре (30±1)°С.

В сыром молоке подавляющее количество микрофлоры представлено мезофильными аэробными и факультативно-анаэробными микроорганизмами. При посеве сырого молока на определение КМАФАнМ не учитываются анаэробные бактерии, количество которых ничтожно по сравнению с общим количеством выявляемых микроорганизмов. Поэтому разницей между показателями бактериальной обсемененности и КМАФАнМ в сыром молоке следует пренебречь.

3.2 турбидофлуориметрия: Оптическая технология, используемая для измерения низких значений флуоресценции в мутных растворах биологических жидкостей, в том числе молоке.

Примечание — Математическая и статистическая обработка динамических значений концентрации флуоресцентного продукта на основе кинетики и стехиометрии микробного роста позволяют точно рассчитать биомассу микроорганизмов.

3.3 турбидофлуориметр: Оптический сенсор, предназначенный для фиксации динамических измерений интенсивности светорассеяния и флуоресценции при заданной температуре в мутных растворах биологических жидкостей, в том числе молоке.

4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и материалы

Турбидофлуориметр* с диапазоном рабочих длин волн от 400 до 650 нм, диапазоном измерений формазиновой суспензии от 100 до 1000 ЕМФ, рабочим диапазоном температуры режима термостатирования от 30°С до 43°С и соответствующим программным обеспечением*.

* Рекомендуемые средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы приведены в приложении А.

Тест-наборы* для определения бактериальной обсемененности в сыром молоке диапазоном измерения от 2·10 до 5·10 КОЕ/см.

Дозаторы пипеточные одноканальные переменного объема от 0,02 до 2 см.

Термометр стеклянный жидкостный (не ртутный) по ГОСТ 28498 диапазоном измерения от 0°С до 100°С и ценой деления шкалы 1°С.

Подогреватель оптический облучающий, обеспечивающий поддержание температурного режима в диапазоне от 25°С до 40°С.

Источник

Определение бактериальной обсемененности молока гост

МОЛОКО И МОЛОЧНАЯ ПРОДУКЦИЯ

Методы микробиологического анализа

Milk and milk products. Methods of microbiological analysis

* Поправка (ИУС 11-2015)

Дата введения 2016-01-01

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом маслоделия и сыроделия Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИМС Россельхозакадемии) и Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии)

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 46-П от 05 декабря 2014 г.)

За принятие проголосовали:

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Минэкономики Республики Армения

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 10 декабря 2014 г. N 1953-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32901-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 01 января 2016 г.

Стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53430-2009

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

ВНЕСЕНЫ: поправка*, опубликованная в ИУС N 11, 2015 год; поправка, опубликованная в ИУС N 6, 2016 год

Поправки внесена изготовителем базы данных

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на молоко и молочную продукцию и устанавливает методы микробиологического анализа.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 83-79 Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия

ГОСТ 490-2006 Кислота молочная пищевая. Технические условия

ГОСТ 745-2003 Фольга алюминиевая для упаковки. Технические условия

ГОСТ 1341-97 Пергамент растительный. Технические условия

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2156-76 Натрий двууглекислый. Технические условия

ГОСТ 2493-75 Реактивы. Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный. Технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 3624-92 Молоко и молочные продукты. Титриметрические методы определения кислотности

ГОСТ 4159-79 Реактивы. Йод. Технические условия

ГОСТ 4170-78 Реактивы. Натрий-аммоний фосфорнокислый двузамещенный 4-водный. Технические условия

ГОСТ 4198-75 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия

ГОСТ 4232-74 Реактивы. Калий йодистый. Технические условия

ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 5556-81 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия

ГОСТ 6259-75 Реактивы. Глицерин. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ ISO 7218-2011 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 9284-75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 10444.12-2013 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Метод выявления и подсчета количества дрожжей и плесневых грибов

ГОСТ 11311-76 Фенол каменноугольный. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13739-78 Масло иммерсионное для микроскопии. Технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 13805-76 Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей. Технические условия

ГОСТ 13928-84 Молоко и сливки заготовляемые. Правила приемки, методы отбора проб и подготовка их к анализу

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 17206-96 Агар микробиологический. Технические условия

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия

ГОСТ 19881-74 Анализаторы потенциометрические для контроля рН молока и молочных продуктов. Общие технические условия

ГОСТ 22280-76 Реактивы. Натрий лимоннокислый 5,5-водный. Технические условия

ГОСТ 23683-89 Парафины нефтяные твердые. Технические условия

ГОСТ 24363-80 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 25706-83 Лупы. Типы, основные параметры. Общие технические требования

ГОСТ 26809.1-2014 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные и молочные составные, молокосодержащие продукты

ГОСТ 26809.2-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, отбор проб и подготовка их к анализу. Часть 2. Масло из коровьего молока, спреды, сыры и сырные продукты, плавленые сыры и плавленые сырные продукты

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 32012-2012 Молоко и молочная продукция. Методы определения содержания спор мезофильных анаэробных микроорганизмов

Источник

ГОСТ 34472-2018 Молоко сырое. Турбидофлуориметрический экспресс-метод определения бактериальной обсемененности

Текст ГОСТ 34472-2018 Молоко сырое. Турбидофлуориметрический экспресс-метод определения бактериальной обсемененности

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ (МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION (ISC,

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

МОЛОКО СЫРОЕ

Турбидофлуориметрический экспресс-метод определения бактериальной обсемененности

ммжжя

СтМ1ЛфТМ1фП[М

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0—2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия. обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН всероссийским научно-исследовательским институтом маслоделия и сыроделия — филиалом Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр пищевых систем им. В.М. Горбатова» РАН (ВНИИМС — филиал ФГБНУ «ФНЦ пищевых систем им. В.М. Горбатова» РАН)

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 28 сентября 2018 г. N9112-П)

За принятие проголосовали:

Кратко* наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

МК (ИСО 31вв> 004-97

Сокращен нов наименование национального органа по стандартизации

Госстандарт Республики Беларусь

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 10 октября 2018 г. № 745-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34472—2018 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2020 г.

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соотеетстеующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также е информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

Содержание

1 Область применения . 1

2 Нормативные ссылки . 1

3 Термины и определения. 2

4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и материалы. 2

5 Отбор проб . 3

6 Условия проведения измерений . 3

7 Определение бактериальной обсемененности сырого молока . 3

8 Обработка результатов. 4

9 Требования безопасности . 5

Приложение А (справочное) Рекомендуемые средства измерений, вспомогательное оборудование

Приложение Б (справочное) валидация турбидофлуориметрического приборного экспресс-метода

определения бактериальной обсемененности сырого молока с арбитражным методом определения КМАФАнМ по ГОСТ 32901 . 7

ГОСТ 34472—2018

Турбидофлуориметрический экспресс-метод определения бактериальной обсемененности

Mik. Turbidofluorimetric rapid method for estimating total bacterial load

Дата введения — 2020—01—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на приборный турбидофлуориметрический экспресс-метод определения бактериальной обсемененности сырого молока по интенсивности флуоресценции веществ. образующихся из флуорогенного субстрата, в процессе жизнедеятельности микроорганизмов.

Диапазон измерения бактериальной обсемененности сырого молока — от 2 • 10 4 до 5 • 10 е КОЕ/см 3 .

2 Нормативные ссылки

8 настоящем стандарте применены нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.0.004—2015 Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения

ГОСТ 12.1.004—91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007—76 Система стандартов безопасности труда, вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019—79* Система стандартов безопасности труда. Электробеэопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009—83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 26809.1—2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты

ГОСТ 27752—88 Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия

ГОСТ 28498—90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227—91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 32901—2014 Молоко и молочная продукция. Методы микробиологического анализа

ГОСТ ИСО 5725-6—2002** Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019—2009 «Система стандартов безопасности труда. Электробеэопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».

по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

Читайте также: Гост бананы температура

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины е соответствии с [1]. а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 бактериальная обсемененность: Количество аэробных, факультативно-анаэробных и анаэробных микроорганизмов, способных проявлять свою жизнедеятельность в сыром молоке при температуре 30 °C.

В сыром молоке подавляющее количество микрофлоры представлено меэофильными аэробными и факультативно-анаэробными микроорганизмами. При посева сырого молока на определение КМАФАнМ не учитываются анаэробные бактерии, количество которых ничтожно по сравнению с общим количеством выявляемых микроорганизмов. Поэтому разницей между показателями бактериальной обсемененности и КМАФАнМ в сыром молоке следует пренебречь.

3.2 турбидофлуориметрия: Оптическая технология, используемая для измерения низких значений флуоресценции в мутных растворах биологических жидкостей, в том числе молоке.

3.3 турбидофлуориметр: Оптический сенсор, предназначенный для фиксации динамических измерений интенсивности светорассеяния и флуоресценции при заданной температуре в мутных растворах биологических жидкостей, в том числе молоке.

4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и материалы

Турбидофлуориметр 1 с диапазоном рабочих длин волн от 400 до 650 нм. диапазоном измерений формазиновой суспензии от 100 до 1000 ЕМФ. рабочим диапазоном температуры режима термостати-рования от 30 °C до 43 °C и соответствующим программным обеспечением 1 .

Тест-наборьГ для определения бактериальной обсемененности в сыром молоке диапазоном измерения от 2 10 4 до 5 ■ 10 е КОЕ/см 3 .

Дозаторы липеточные одноканальные переменного объема от 0.02 до 2 см 3 .

Термометр стеклянный жидкостный (не ртутный) по ГОСТ 28498 диапазоном измерения от О °C до 100 °C и ценой деления шкалы 1 °C.

Подогреватель оптический облучающий, обеспечивающий поддержание температурного режима в диапазоне от 25 1 С до 40 1 С.

Часы по ГОСТ 27752. секундомер или таймер.

Встряхиеатель вибрационного типа со скоростью вращения до 3000 об/мин.

Контрольный образец для контроля тест-наборов 1 .

Пробирки пластиковые среднестенные с плоской крышкой стерильные (типа Элпендорф) вместимостью 1,5 см 3 .

Допускается применение другого оборудования, не уступающего вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающего необходимую точность измерения, а также материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

5 Отбор проб

5.1 Основные понятия и общие правила отбора проб — по ГОСТ 26809.1.

5.2 Отбор проб сырого молока при проведении микробиологических анализов проводят перед от* бором проб для физико-химических и органолептических анализов в соответствии с ГОСТ 32901.

При контроле бактериальной обсемененности турбидофлуориметрическим методом из объединенной пробы сырого молока, предназначенной для проведения микробиологических анализов объ* емом не менее 500 см 3 , отбирают пробу для анализа объемом от 50 до 100 см 3 в соответствии с ГОСТ 32901 (раздел 5).

Перед отбором проб сырое молоко должно быть тщательно перемешано.

5.3 Пробы сырого молока не подлежат консервированию и хранению. Их анализируют непосредственно после отбора для получения более объективных результатов измерений.

6 Условия проведения измерений

При выполнении измерений следует соблюдать следующие условия:

— температура окружающего воздуха. от 15 ’С до 28 *С;

— относительная влажность воздуха. от 20 % до 80 %;

• атмосферное давление. от 84 до 106 кПа.

7 Определение бактериальной обсемененности сырого молока

7.1 Сущность метода

Метод основан на измерении скорости образования флуоресцентных веществ из флуороген-ных субстратов в результате жизнедеятельности микроорганизмов. Скорость изменения флуоресценции прямо пропорциональна биомассе жизнеспособных микроорганизмов в сыром молоке. Исходя из средней массы бактериальной клетки, равной 1 пг. программное обеспечение прибора трансформирует значение биомассы в наиболее вероятное число клеток микроорганизмов (НВЧ/см 3 ): биомасса (пг) <=> НВЧ/см 3 <=> КОЕ/см 3 .

7.2 Подготовка к проведению измерений

7.2.1 Подготовка к работе турбидофлуориметра

Турбидофлуориметр располагают вдали от источников тепла и сильного электромагнитного излучения. избегая попадания на него прямых солнечных лучей.

Подготовку турбидофлуориметра и его эксплуатацию следует проводить в соответствии с рекомендациями инструкции или паспорта на прибор.

Перед выполнением измерений проводят холостую пробу для регистрации фоновых значений в соответствии с инструкцией к прибору.

7.2.2 Подготовка тест-наборов

7.2.2.1 При хранении тест-наборов при температуре от 4 *С до 10 °C до начала выполнения измерений тест-набор с пробирками необходимо выдержать в помещении при комнатной температуре для их отепления.

Перед выполнением измерений реагенты в тест-пробирке активируют путем встряхивания.

7.2.2.2 Проверку тест-набора следует проводить ежемесячно, либо при появлении сомнительных результатов.

Контроль качества тест-пробирок, входящих в тест-набор, и правильности выполнения процедуры измерения осуществляют согласно инструкции по эксплуатации, используя контрольный образец сухих реагентов, поставляемых вместе с прибором.

7.3 Проведение измерений

7.3.1 Перед началом измерения пробу для анализа исследуемого сырого молока, предварительно нагретого до комнатной температуры, тщательно перемешивают до получения максимально однородного распределения клеток микроорганизмов в объеме пробы. Точность дальнейшего измерения во многом определяется однородностью распределения клеток микроорганизмов в пробе молока.

7.3.2 С помощью дозатора или стерильной мерной пипеткой отбирают 1.3 см 3 сырого молока, которое помещают е микропробирку и перемешивают на естряхивателе вибрационного типа в течение 15 с.

Подогрев сырого молока в микропробирке до температуры (30 ± 2) °C (или температуры, указанной в документах изготовителя тест-наборов ло определению общего количества микроорганизмов) проводят в течение 10 мин в оптическом облучающем подогревателе.

7.3.3 Подогретую пробу сырого молока из микропробирки переливают в предварительно активированную тест-пробирку и плотно закрывают крышкой. Объем сырого молока в активированной тест-пробирке должен быть не менее 1,2 см 3 .

7.3.4 Перед началом измерения визуально оценивают цвет сырого молока в тест-пробирке. Появление розовой окраски различной интенсивности свидетельствует о высокой бактериальной обсемененности, превышающей диапазон измерения. Такое сырое молоко не подлежит дальнейшему контролю.

7.3.5 Содержимое тест-пробирки с пробой сырого молока перед началом измерений перемешивают на естряхивателе вибрационного типа в течение 10—15 с. Тест-пробирку с перемешанной пробой сырого молока помещают в турбидофлуориметр и плотно закрывают крышку прибора.

В зависимости от степени обсемененности молока время измерения составляет от 8 до 20 мин. После завершения измерения результат появится на мониторе в протоколе испытаний.

7.3.6 Проводят два параллельных измерения.

При этом важно соблюдать последовательность выполнения измерений согласно 7.3.1—7.3.5.

8 Обработка результатов

8.1 За результат измерений принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости (1).

В случае если бактериальная обсемененность составляет менее 2 10 4 КОЕ/см 3 (т. е. результат находится за пределами нижней границы диапазона измерений), то результат записывают «менее 2 • 10* КОЕ/см 3 ».

В случае если бактериальная обсемененность молока превышает верхнюю границу диапазона измерений, то результат записывают «более 5 10 б КОЕ/см 3 ».

Данные валидации турбедофлуориметрического приборного экспресс-метода определения бактериальной обсемененности сырого молока с арбитражным методом определения КМАФАнМ ло ГОСТ 32901 приведены в приложении Б.

8.2 Контроль точности измерений

Характеристики погрешности и прецизионности при доверительной вероятности Р — 0,95 приведены в таблице 1.

Источник